基因毒性杂质是指可能对生物体细胞的遗传物质（DNA或RNA）造成损害的化合物或物质。这些杂质可能导致基因突变、染色体畸变、DNA断裂等不良影响，进而影响细胞的正常功能和生长，甚至引发癌症等疾病。近年对基因毒性杂质的重视持续提升，引发了更多关于基因毒性杂质的研究和探讨。在新药研发的过程中，基因毒性杂质是我们不得不面对一个重要的问题。对其进行充分的研究和评估至关重要，可以保障患者安全，提高药物品质，符合监管要求，是新药研发中的关键步骤之一。

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01 可以用mini-Ames 试验代替Ames试验吗？

毕增：按照我们的经验，在IND申报阶段，杂质使用mini-Ames试验可作为正式Ames试验的替代材料进行申报。然而，在新药上市申报和仿制药上市申报时应该采用标准Ames试验，要注意M7（R2）的注释2所说的微量化测试并不是指mini-Ames试验，是指待测化合物数量有限不能使用符合指导原则的试验浓度时可以采取的措施。

02 仿制药研发，每个杂质都需要进行软件评估吗？

毕增：是的，M7（R2）问答中明确建议对所有杂质进行模拟和评估。通过我直播中分享的案例，可以看到一些化合物，即使没有基因毒性警示结构，也可能具有基因毒性。因此，即使某些化合物不在我们的警示结构列表中，仍需对其进行评估，因为它其实也是可能有基因毒性的。

03 如果有Ames试验数据，还需要进行软件评估吗？

毕增：需要根据情况而定。如果数据库收录的Ames试验是不是符合OECD指导原则或ICH S2的标准Ames试验，即是否使用了5种菌株，并且在有代谢激活和没有代谢激活两种途径下都进行了实验，并且试验应该是符合GLP规范的，在满足以上前提的情况下，Ames试验Negative，那么就无需进行软件评估，但是需要进行比较全面的数据库检索。

04 是在药品研发的哪个阶段评估呢？

毕增：根据我的理解，需要根据每个项目的具体情况进行分析。我的建议是，在工艺稳定后，例如工艺路线已经确定并且优化工作已经完成后，在小试生产阶段同步开展评估。在这个阶段，通常不会对之前的工艺进行大幅调整，除非在后续放大过程中发现了一些问题，例如放大效应导致杂质超标或者收率较大幅度的。一般情况下，建议在小试验阶段进行相应的评估。这样可以提前进行方法开发和简单确认工作，并且随着逐步放大的过程，积累数据，为后续的杂质控制策略提供数据支持。

05 Case ultra 预测合规吗？CDE老师认可代替AMES实验吗？

毕增：这个是合规的，可以放心。因为我们完成的多个仿制药项目，包括新药的IND申报，还是客户委托完成的发补的杂质预测，都有使用 Case ultra进行预测，都是没有问题的。

Case ultra有Statistical Model（GT1_BMUT）统计学模型，该模型是通过RCA协议与美国FDA合作开发和验证的模型，训练集中包含13760个化合物；同时有Expert Rule Model（GT_EXPERT）专家规则模型，参考数据集中有17309个化合物作为参考数据集用于验证规则。警示结构的数量有240个，包含普通的阳性警示结构，阳性减弱和阳性增强的子类型以及全局的阳性减弱的警示结构。

Case ultra可以满足ICH M7同时使用两种模型对化合物进行预测的要求，并且所有的模型都是进行过严格验证的，可以查看后台数据，可以查看警示结构和相关细节，拥有明确的算法和良好的预测透明度，符合OECD的相关规则。

06 三氟甲磺酸那个案例中样品本身就有三氟甲磺酸，这个水解方式还能行吗？

毕增：这个案例是由于在方法开发初期，我们对API进行了三氟甲磺酸的检测，并未检出该杂质。基于这个结果，我采用这种检测方法，如果样品中本身就有三氟甲磺酸检出，则会导致杂质被高估，这种情况下可以检测水解后生成的另一个片段，比如说在案例中的3-羟基-2-硝基吡啶。

07 杂质的软件评估都可以使用哪些软件？

毕增：除了Case Ultra之外，Derek和Sarah也是同样优秀的商业预测软件。当然，除了商业软件外，也有一些免费的软件，比如VEGA GUI，我个人使用过该软件，预测的结果并不明确。可能是因为软件覆盖的的数据库相对较小，覆盖的化合物种类也有限，导致用于训练软件算法的化合物数量较少，从而影响了计算结果的可靠性，合规性方面有较大的挑战，大家使用这类软件的时候还是要慎重一些。

08 临床上单次使用的局部给药制剂中有一个杂质超过了界定限度，要做哪些安全性评价？

毕增：对于制剂中超过界定限度的杂质，建议按照ICH Q3B（R2）的附件3-降解产物鉴定和界定决策树进行研究，首先要确定该杂质是否能降低至小于等于界定限，如果不能的话则考虑根据患者人群、用药时间进行以下研究：致突变性研究（点突变、染色体畸变）、一般毒性研究（单个种类，通常14至90天）或者酌情考虑是否开展其他的毒性终点试验。