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【云回顾】病理研究之细节决定TCR试验的成败

2020-11-17
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1、什么是TCR?

组织交叉反应(Tissue Cross-Reactivity)是在体外检测抗体药物与组织上的抗原表位结合的试验。目的是确认受试抗体与药效靶组织抗原表位的结合,检测抗体是否与非靶部位组织抗原结合,为确定非临床安全性试验相关动物种属及预测毒性靶器官提供参考。

2、为什么要做TCR?

抗体药物具有免疫特性,除了与把抗原结合外,如果人体正常组织中存在相同或相似的抗原表位,还会与靶器官外的其他组织细胞结合从而产生严重的不良反应。

因此,进行TCR试验是抗体药物临床前安全性评价的重要组成部分,对于抗体药物的研发至关重要,也是国内外监管机构的要求。

3、TCR试验的核心技术是?

免疫组织化学技术(IHC,immunohistochemistry)。采用冰冻或固定组织标本,切片,并用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应对组织染色,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。

4、试验所需的人体器官组织从哪里来呢?

捐献人体组织、手术取组织、胎盘组织、细胞系、商业化人体组织芯片。

5、如何正确的处理新鲜的组织?

将新鲜的组织进行冰冻,不建议使用化学固定法。

冰冻时要注意迅速冷冻,尽量避免缓冻或者反复冻融,会在组织中形成冰晶,破坏组织,也给后面的试验带来观察障碍。

6、如何判断我的病理切片是否封闭好了?

利用抗转铁蛋白受体抗体对组织进行染色。若组织切片中的血细胞呈淡淡的黄褐色,那么表明切片封闭好了。

7、组化染色时何时选择一步法(直接法)?

一步法是将生物素标记与一抗偶联,只需要一步免疫组化反应便完成染色的方法。这种方法避免了二抗的非特异性染色,减少了干扰。但是由于一抗与生物素的结合,很有可能会破坏了一抗的空间结构,尤其是抗体抗原结合位点,造成假阴性或假阳性。

8、TCR试验当中经常会碰到的问题有哪些?

  • 假阳性/假阴性

  • 脱片

  • 非特异性染色

  • 边缘效应

  • “阴阳脸”

  • 。。。

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